Cadre
Cette page décrit une manipulation de laboratoire. Elle ne donne aucune instruction d’administration à l’humain.
Le matériel à réunir
- Le flacon de MOTS-c et le certificat d’analyse de son lot, qui indique la quantité déclarée en mg.
- Un solvant stérile adapté au protocole. Les fiches fournisseurs consultées citent l’eau bactériostatique ou un diluant stérile.
- Des seringues et aiguilles stériles à usage unique, des tampons d’alcool.
- Des étiquettes, un marqueur indélébile et, si besoin, des tubes stériles pour préparer des aliquotes.
Le protocole en sept gestes
- Laisser le flacon revenir à température ambiante, fermé, pour éviter que de la condensation se forme sur la poudre.
- Contrôler le flacon : opercule intact, poudre sèche, numéro de lot identique à celui du certificat.
- Désinfecter les bouchons du flacon et du solvant avec un tampon d’alcool, puis laisser sécher.
- Prélever le volume de solvant choisi et le noter : c’est lui qui fixe la concentration finale.
- Injecter lentement le long de la paroi du flacon, sans projeter le jet directement sur la poudre.
- Dissoudre en douceur, en faisant rouler le flacon entre les doigts. Ne pas secouer : l’agitation fait mousser la solution et peut dégrader un peptide.
- Vérifier et étiqueter : la solution doit être limpide. Noter le peptide, la concentration, la date et le numéro de lot, puis ranger au froid sans attendre.
Pour une version illustrée de ces étapes, le guide de reconstitution publié par Peptides EU reprend la même logique, avec ses propres recommandations de manipulation.
Quelle concentration obtient-on ?
La concentration dépend de deux valeurs seulement : la quantité de peptide dans le flacon et le volume de solvant ajouté. Concentration (mg/mL) = quantité (mg) ÷ volume (mL). Le tableau ci-dessous applique simplement cette formule aux formats courants.
| Quantité dans le flacon | Volume de solvant ajouté | Concentration obtenue |
|---|---|---|
| 10 mg | 1 mL | 10 mg/mL |
| 10 mg | 2 mL | 5 mg/mL |
| 10 mg | 5 mL | 2 mg/mL |
| 20 mg | 2 mL | 10 mg/mL |
| 20 mg | 4 mL | 5 mg/mL |
| 40 mg | 4 mL | 10 mg/mL |
Un volume plus important donne une solution plus diluée, plus facile à fractionner avec précision. Un volume plus faible donne une solution plus concentrée. Dans tous les cas, c’est la quantité réellement présente dans le flacon qui compte : voir la notion de teneur nette dans la checklist qualité.
Conserver la poudre et la solution
| État | Rangement | Précautions |
|---|---|---|
| Poudre lyophilisée, flacon fermé | Les fiches fournisseurs consultées indiquent −20 °C pour un stockage long et 2 à 8 °C pour un stockage court | Garder le flacon sec et à l’abri de la lumière ; le laisser revenir à température ambiante avant ouverture |
| Solution reconstituée | Réfrigérateur, à l’abri de la lumière | Respecter le délai d’utilisation indiqué par le fournisseur ; ne pas laisser à température ambiante |
| Aliquotes congelées | Congélateur | Décongeler une aliquote à la fois et ne pas la recongeler |
Pourquoi préparer des aliquotes ?
Chaque cycle de congélation et de décongélation expose le peptide à des contraintes physiques. Répartir la solution en petites fractions permet de ne sortir que la quantité nécessaire. La séquence du MOTS-c contient deux méthionines, des acides aminés sensibles à l’oxydation : une méthode d’analyse publiée intègre d’ailleurs deux produits d’oxydation du MOTS-c parmi les formes recherchées [1].
Les erreurs fréquentes
- Secouer le flacon pour accélérer la dissolution.
- Oublier de noter le volume de solvant, ce qui rend la concentration inconnue.
- Laisser la solution à la lumière ou à la chaleur.
- Multiplier les congélations et décongélations du même flacon.
- Utiliser un solvant non stérile ou une aiguille déjà employée.
Références
- Knoop A, et al. Development of a mass spectrometry based detection method for the mitochondrion-derived peptide MOTS-c in plasma samples for doping control purposes. Rapid Commun Mass Spectrom. 2019. PubMed 30394592